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禽白血病是危害我国养禽业的一种病毒性肿瘤病。A、B亚群的禽白血病病毒(ALV)主要感染蛋鸡,A亚群诱发鸡的淋巴细胞白血病。J亚型是从肉鸡中分离出来的一个新的囊膜亚群,能诱导鸡产生骨髓细胞瘤病。2008年以来,我国爆发了禽白血病,给我国养鸡业造成了重大的经济损失。在国家中长期动物疫病防治规划(2012-2020年)中,禽白血病被列为优先防治的动物疫病。
净化方案的建立和配套检测试剂盒的研制,为我国大型养殖企业开展禽白血病的净化提供了技术指导和检测手段,加之配套检测试剂盒较国外同类试剂盒有明显的价格优势。利用该试剂盒开展的禽白血病净化,每个蛋清或肛拭子样品在4.5-5.5元左右,而进口试剂盒在6.5-7.5元左右,使净化成本降低30%左右。由于检测费用的大幅降低,提高了养殖企业开展净化工作的积极性。净化技术方案已在多个省区的养殖场应用,净化效果显著,增产增效明显。仅江苏和广西两个大型养殖场应用该技术方案和配套检测试剂盒,2013-2015年就降低经济损失6000余万元,新增利润7600余万元。该技术的广泛应用,使我国禽白血病的发生得到了有效控制,提高了我国本地鸡种育种水平,也促进了养禽业的健康发展。
净化技术方案:
通过对净化技术方案各项指标(采样时间、样品种类、检测方法、评价方法)的优化,结合我国品种繁多、生产性能差异大等特点,形成了1套禽白血病净化技术方案(表1)。该方案的特点是:①
检测时间上,覆盖了1日龄、开产前、开产受精前和留种前4个关键时期。将一个世代的检测次数由国外推荐的6-8次降低到了4次,尽量降低了养殖户的检测成本;②开产后主要检测蛋清,克服了肛拭子的高假阳性率。
禽白血病净化技术方案
日龄样品检测方法采样范围1天胎粪免疫胶体金检测试纸条全群10-15周龄*肛拭子病毒分离全群配套的检测试剂盒:禽白血病病毒ELISA群特异性抗原检测试剂盒和禽白血病病毒免疫胶体金检测试纸条
p27为ALV衣壳蛋白,在各亚群中高度保守,是ALV重要的群特异性抗原,是禽白血病净化过程中重要的检测抗原。禽白血病病毒ELISA群特异性抗原检测试剂盒就是利用抗p27蛋白单克隆抗体研制而成的。由于包被抗体和检测抗体使用了抗p27蛋白的不同单克隆抗体,保证了试剂盒的敏感性和特异性。该试剂盒可以检测到1.25ng/ml的群特异性抗原,
在敏感性上优于同类进口试剂盒。与禽流感、新城疫、鸡传染性法氏囊等常见禽病病原无交叉反应,特异性好。同时研制了高效的防腐剂和酶标抗体保护剂配方,使试剂盒具有良好的稳定性。
迫于胎粪检测的时效性要求高,研制了禽白血病病毒免疫胶体金检测试纸条,该试纸条同样以p27抗原为检测靶标,以抗p27蛋白的不同单克隆抗体制备。其优势在于检测时限由ELISA的3小时左右缩短到15分钟,而且对检测人员的技术要求也低,更适合于禽白血病净化中胎粪的现场检测。
该技术适用于大型养殖场、保种场等需要开展禽白血病净化的养禽场。
1、需按照净化程序采样检测,种鸡编号,一一对应。
2、阳性鸡必须及时淘汰。
3、蛋清检测时,每只母鸡需采集2-3枚种蛋进行检测。
4、留种孵化时采用小群孵化可有效降低水平传播。
5、试剂盒中各种液体试剂使用前应充分摇匀,平衡至室温。